小反芻獸通用疫苗PPR-U/PPR-V熒光PCR試劑盒說明書

通用名稱：小反芻獸疫通用型/疫苗株（PPR-U/ PPR-V）雙重核酸檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光-PCR法）

英文名稱：Dual nucleic acid detection kit for universal/vaccine strain of small ruminant disease (PPR-U/PPR-V) (real-time fluorescence-PCR)

二、包裝規(guī)格  25T/盒、50T/盒

三、預(yù)期用途 小反芻獸疫病毒檢測(cè)試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，定性檢測(cè)小反芻獸疫病毒，對(duì)小反芻獸疫病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

四、小反芻獸疫病毒檢測(cè)試劑盒原理

   小反芻獸疫病毒檢測(cè)試劑盒針對(duì)小反芻獸疫病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含小反芻獸疫病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。

五、小反芻獸疫病毒檢測(cè)試劑盒組成

RT-PCR反應(yīng)液、逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照

六、儲(chǔ)存及有效期

避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期為12個(gè)月。

七、適用儀器  ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

反應(yīng)液 1.0mL×1 管

陽(yáng)性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

注：

1）不同批號(hào)試劑不能混用。

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線丏無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

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