植物葉綠醇激酶ELISA試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中指標表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中指標相結合，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）與待測樣品中植物葉綠醇激酶濃度呈正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中植物葉綠醇激酶的濃度。
樣本準備：
血清：采集后3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，分離血清。
血漿：使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘取上清。
組織勻漿：加生理鹽水搗碎組織，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清。
所有樣本若不立即檢測，應分裝凍存于-20℃，避免反復凍融。
試劑準備：
試劑盒在2-8℃保存，使用前室溫平衡20分鐘。
20×洗滌緩沖液按1：19比例用蒸餾水稀釋成1×工作液。
操作步驟：
取出所需板條，設置標準品孔（S0-S5）和樣本孔。
標準品孔加50μL不同濃度標準品；樣本孔先加10μL待測樣本，再加40μL樣本稀釋液。
每孔加入HRP標記的檢測抗體100μL（空白孔除外），封板后37℃溫育60分鐘。
棄去液體，拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩凈，重復5次。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。
每孔加終止液50μL，15分鐘內(nèi)于450nm波長下測定OD值。
結果計算：
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線。
根據(jù)樣本OD值在曲線上查得對應濃度，乘以稀釋倍數(shù)（通常為5）即為實際濃度。
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更新時間：2026-05-12
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